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當前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 科樂福CLOVER親和柱系列 > 真菌毒素系列 > 25支/盒,3ml/1mlIAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫親和柱

IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫親和柱

簡要描述:IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫親和柱,能夠特異性的純化與濃縮樣品中的赭曲霉毒素A。赭曲霉毒素A免疫親和柱廣泛地應用于糧食、飼料、大豆、油菜籽、植物油、醬油、醋、醬及醬制品和酒類等樣品的提取,該方法速度快、操作簡單、準確性高,對準確靈敏的測定樣品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用。

  • 產(chǎn)品型號:25支/盒,3ml/1ml
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-04-23
  • 訪  問  量:1727

詳細介紹

品牌clover/科樂福供貨周期現(xiàn)貨
應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,食品,化工,煙草,制藥

IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫親和柱

(產(chǎn)品編號:IAC105

使用對象

赭曲霉毒素A免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的赭曲霉毒素A。赭曲霉毒素A免疫親和柱廣泛地應用于糧食、飼料、大豆、油菜籽、植物油、醬油、醋、醬及醬制品和酒類等樣品的提取,該方法速度快、操作簡單、準確性高,對準確靈敏的測定樣品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用。

適用于以下標準:

GB/T 23502-2009 食品中玉赭曲霉毒素A的測定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法

SN/T 1746-2006 進出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的檢測方法

 

原理

樣品經(jīng)甲醇+水提取液提取、過濾、稀釋,然后通過鍵合有赭曲霉毒素A特殊抗體的免疫親和柱。此時,赭曲霉毒素A被親和柱中的抗體特異性的吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將赭曲霉毒素A從親和柱上洗脫下來。后,用HPLC或熒光計進行定量檢測。

儲存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下,不能冷凍,保質期為18個月。建議在室溫(18-30°C)下使用。

 

實驗溶液制備

提取液1,甲醇/水(8+2):取80mL甲醇加20mL水,混合均勻。

提取液2,稱取150g氯化鈉,20g碳酸氫鈉溶于900mL水中,用水定容至1L

 HPLC流動相,乙腈//乙酸(99+99+2):取495mL乙腈和10mL乙酸于1L容量瓶中,用純水定容至1L,用0.22微米的尼龍篩過濾。

標準溶液的配制:取赭曲霉毒素A標準儲備液,流動相為稀釋液,配制標準品溶液。例如:取100uL標準品儲備液10ug/mL10mL容量瓶中,用流動相定容至10mL,那么,赭曲霉毒素A標準品濃度為100ng/mL              

注:配制好的標準品溶液有效期為7

沖洗液:稱取25g氯化鈉,5g碳酸氫鈉溶于900mL水中,用水定容至1L

真菌毒素清洗緩沖液:稱取25g氯化鈉,5g碳酸氫鈉溶于900mL水中,加入0.1mL吐溫-20,用水定容至1L

pH 7.0 PBS溶液:稱取8.0g氯化鈉,1.44g磷酸氫二鈉,0.24g磷酸二氫鉀,0.2gKCL,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調節(jié)pH值至7.0,后用純水稀釋至1000mL。

 

液相色譜條件

色譜柱:Cloversil-C18 4.6*150mm5um

流動相:乙腈//乙酸(99+99+2

流速:0.8mL/min

檢測器:熒光檢測器,激發(fā)波長333nm,發(fā)射波長477nm

進樣體積:20~100uL

 

分析步驟

赭曲霉毒素免疫親和柱的柱容量(大吸附赭曲霉毒素)100ng,當樣品中赭曲霉毒素A超過測定范圍時,請適當減小上柱體積,使其在檢測范圍內(nèi),計算出準確含量。

 

  1. 樣品提取及稀釋

谷物、糧食、大豆、油菜籽、植物油等樣品:(測定范圍0-250μg/kg) 稱取20g磨細的樣品,5g 氯化鈉;置于250mL具塞錐形瓶中,或勻質杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均質器高速勻質提取2min。取下蓋子,將提取物到入槽紋濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液,置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

飼料,辣椒樣品:(測定范圍0-400μg/kg)稱取25g磨細的樣品,5g 氯化鈉;置于250mL具塞錐形瓶中,或勻質杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均質器高速勻質提取2min。取下蓋子,將提取物到入槽紋濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。移取5 mL上步的濾液,置于干凈的容器中。用45 mL pH 7.0 PBS溶液稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

酒類:(測定范圍0-62.5μg/kg)稱取20g樣品(含二氧化碳類酒稱取前置于4℃冰箱冷藏30min,然后過濾或超聲制樣),置于25mL容量瓶中,加入提取液2定容至25mL,搖勻。移取10 mL上步的溶液,置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

醬油,醋,醬及醬制品:(測定范圍0-100μg/kg)稱取25g樣品,置于50mL容量瓶中,加入甲醇/水(8+2)定容至50mL,超聲提取2min。將提取物到入槽紋濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液,置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

2) 樣品的凈化

谷物、糧食、大豆、油菜籽、植物油、飼料、辣椒、醬油,醋,醬及醬制品等樣品:將上步10 mL濾液,以1滴/秒的流速全部通過赭曲霉毒素A免疫親合柱,直至空氣進入到親合柱中。用10 mL真菌毒素清洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱;再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,直至空氣進入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,將所有樣品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃測試管中。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋,混勻,注入HPLC檢測;或將1.5mL淋洗液在50℃氮氣下吹干,用1mL流動相定容后,混勻,注入HPLC檢測。

酒類:將上步10 mL濾液,以1滴/秒的流速全部通過赭曲霉毒素A免疫親合柱,直至空氣進入到親合柱中。用10 mL沖洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱;再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,直至空氣進入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,將所有樣品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃測試管中。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋,混勻,注入HPLC檢測;或將1.5mL淋洗液在50℃氮氣下吹干,用1mL流動相定容后,混勻,注入HPLC檢測。

 

IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫親和柱注意事項

 

  1. 親和柱凈化后的洗脫液不能用尼龍膜或有機系膜過濾,負責會損失部分赭曲霉毒素。
  2. 樣品添加回收試驗時,標準品添加到樣品中,靜置2小時后或過夜,再進行樣品前處理,否則會出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象。
  3. 不要隨便更改操作說明書中的操作步驟,如需更改要和本公司技術部聯(lián)系,確認更改是否合理。
  4. 操作步驟中,樣品過柱,淋洗,洗脫時,一定要控制好流速,不能太快,否則會使檢測結果偏低。
  5. 如果將標準品直接過柱驗證回收率時,一定要確保標準上柱液中甲醇濃度不要超過25%,否則會影響柱子的吸附能力。
  6. 試驗中使用的玻璃儀器等,一定要清洗干凈,尤其是用次氯酸等處理過的儀器,否則會使檢測結果偏低
  7. 當用氮氣濃縮洗脫液時,氮氣流不要太大,否則會損失部分赭曲霉毒素。

 

需要準備的設備及試劑

C/N編號

物品

ZJ0612

Clover12位泵流操作架(配有1臺空氣泵,610mL針筒)

20202

高速勻質器,轉速可達18,000 r/min ~22,000 r/min

31955

美國vicam微纖維濾紙(1.5um100/盒)

31240

折疊式槽紋濾紙(100/盒)

36010

一次性塑料燒杯(25/)

34000

一次性測試管(250/)

36020

塑料漏斗(10 /)

 

赭曲霉毒素A標準品

35016

色譜純級的甲醇(4/瓶)

 

色譜級乙腈(4/瓶)

C546150-U

Cloversil  C18 反相色譜柱4.6*150mm5um

C546250-U

Cloversil  C18 反相色譜柱4.6*250mm5um

 

玉米、飼料等基質含有不同水平赭曲霉毒素A的質控樣品

 

真菌毒素清洗液(10×)

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