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肝素親和柱-HPLC法測定乳品中的乳鐵蛋白

更新時間:2024-01-07      點擊次數(shù):2140

肝素親和柱-HPLC法測定乳品中的乳鐵蛋白


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什么是乳鐵蛋白?

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乳鐵蛋白可以響應(yīng)各種生理和環(huán)境的變化,因此它被認(rèn)為是先天防御系統(tǒng)的關(guān)鍵組成成分。乳鐵蛋白對多種細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和寄生蟲表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗菌活性。它還具有抗炎和抗癌活性,并具有多種酶功能。乳鐵蛋白在維持體內(nèi)細(xì)胞鐵水平中起關(guān)鍵作用。

乳鐵蛋白添加量并不是越高越好,如果嬰幼兒配方奶粉中乳鐵蛋白含量過高,長期飲用會導(dǎo)致寶寶攝入過量的鐵,易引起鐵中毒,另外體內(nèi)乳鐵蛋白含量過高時還有可能會增加腎臟負(fù)擔(dān)。

國家衛(wèi)生部2012-3-15頒布實施的《GB-14880-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑使用標(biāo)準(zhǔn)》明確規(guī)定了食品中的添加劑量,每100g≤100mg。

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肝素親和柱簡介

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使用對象

IAC-SEP肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白,它廣泛的應(yīng)用乳制品樣品的凈化,該方法速度快、操作簡單、準(zhǔn)確性高,對提高乳制品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。

原理

肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白,樣品前處理后,通過親和柱凈化,乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上,用淋洗液將親合柱上的雜質(zhì)除去,用洗脫液通過分離柱,將乳鐵蛋白親和柱上分離下來,最后,將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測定。

樣品前處理:

1、液體奶樣品:

  • 牛初乳乳鐵蛋白參考含量1-2mg/g,建議稱量2-5g.

  • 普通牛奶中乳鐵蛋白參考含量小于0.5mg/g,建議稱量10-20g.

稱取 1-20g樣品(根據(jù)需要的檢測范圍確定稱量多少),置于50 mL離心管中。將20-30mL 結(jié)合緩沖液加入到離心管中,震蕩混勻;將混勻樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,用結(jié)合緩沖液定容至50mL,搖勻。將樣本4℃條件下10000 RPM離心10 min,準(zhǔn)確吸取中間層液體10mL,作為上樣液?;虿捎梦⒗w維過濾,準(zhǔn)確吸取濾液10 mL,作為上樣液。


2、固體樣品:(嬰幼兒配方奶粉、乳粉等)

稱取 4g(精確至0.01 g)試樣,置于250 mL 燒杯中。將70 mL 已預(yù)熱到40 ℃的結(jié)合緩沖液加入到樣品中,用玻璃棒將其混合均勻,并溶解。將樣品移入100 mL 容量瓶中,用少量的結(jié)合緩沖液分次洗滌燒杯,洗滌液一并移入容量瓶中,用結(jié)合緩沖液定容至刻度,搖勻后分別移至兩個50 mL離心管中,在4℃條件下10000RPM離心10 min,準(zhǔn)確吸取中間層液體10mL,作為上樣液。或采用微纖維過濾,準(zhǔn)確吸取濾液10 mL,作為上樣液。


3、液相色譜條件

色譜柱:Cloversil XB-C4, 5μm, 300?, 4.6×250mm

流速:1.0 mL/min

檢測器:紫外檢測器,280nm

進(jìn)樣體積:50uL

流動相:0.1%三fu乙酸與乙腈梯度洗脫,

見下表

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高效液相色譜儀檢測乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)譜圖如下:

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需要準(zhǔn)備的設(shè)備及試劑(中檢維康提供)

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